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Un spectrophotomètre est utilisé pour déterminer la concentration de certains composés, tels que les protéines, dans une solution. En général, une lumière brille à travers une cuvette remplie d'un échantillon. La quantité de lumière absorbée par l'échantillon est mesurée. Étant donné que les composés absorbent la lumière dans différentes gammes spectrales, la longueur d'onde appropriée doit être définie pour l'analyse. Il existe de nombreuses façons de calculer la concentration d'échantillons inconnus par spectrophotométrie. Cependant, l'utilisation d'étalons de référence donne la meilleure précision. En outre, les normes indiquent également si le spectrophotomètre ne fonctionne pas correctement ou si l’analyse pose d'autres problèmes.
Calculer à l'aide d'équations droites
Analyser les normes de référence au début de l'analyse. Les normes sont des concentrations connues et sont utilisées pour étalonner le matériel et vérifier sa précision. Tous les échantillons doivent se situer dans la plage de travail des normes. Sinon, les échantillons devront être dilués ou la concentration d'étalons augmentée.
Réalisez un diagramme de dispersion ou un graphique linéaire avec les lectures de concentration et d’absorbance standard. La concentration sera sur l'axe des y, l'absorption sur l'axe des x. Par exemple, les normes sont 1 ppm, 2,5 ppm et 5 ppm. L'absorption donnée était de 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 et 5 ppm = 0,75.
Formatez la ligne de tendance pour afficher une équation sur le graphique. L'équation montrera la formule y = mx + b. Par exemple, en utilisant les normes de l’étape 2, l’équation est la suivante: y = 0,1224x + 0,1531. La plupart des courbes de tendance sont interceptées à zéro, mais cela dépend de la méthode analytique et de la valeur de R au carré.
Analyser des échantillons inconnus et enregistrer les lectures d'absorption.
Utilisez l'équation (y = mx + b) pour déterminer la concentration des échantillons.
Comprendre l'équation en ligne droite
Laissez "Y" égal à la concentration. C'est ce qui sera résolu pour.
Laisser "X" égal à la capacité d'absorption de l'échantillon. C'est l'absorbance mesurée par le spectrophotomètre.
Autoriser “” à égaler la pente et “b” à égaler l'ordonnée à l'origine. Les deux sont donnés, cependant si la ligne de tendance a été forcée à 0, alors «b» sera 0.
Résoudre pour la concentration. En utilisant l'exemple de l'étape 3, remplacez "x" par une absorbance donnée de 0,563. Donc:
y = 0,1224 (0,563) + 0,1531
y (concentration) = 0,222011