Contenu
- Dilution des échantillons, placage et incubation
- Comptage manuel
- Comptage automatisé
- Rendre le comptage plus compliqué
L'une des méthodes classiques pour déterminer la concentration de microbes dans un échantillon consiste à diluer l'échantillon, à faire croître les microbes sur des plaques et à compter les colonies. Les microbes plaqués se développent à partir d'une unité formant une colonie composée d'une ou de plusieurs cellules en une colonie visible qui peut être vue et comptée. Les bactéries sont les microbes les plus courants à évaluer à l'aide du nombre de plaques. La numération des colonies permet de détecter et de compter les microbes présents dans le sol, l’eau et les aliments. Les protocoles de dénombrement des colonies insistent sur une approche précise et méthodique.
Dilution des échantillons, placage et incubation
Si vous étalez simplement un échantillon de microbe sur une plaque d'agar, vous verrez tellement d'unités formant des colonies que les colonies individuelles se mélangeront, les rendant impossibles à compter. Pour résoudre ce problème, mélangez l'échantillon dans un milieu liquide, prenez une petite quantité de ce mélange et diluez-le davantage. Répétez ce processus six à dix fois. Étaler la dilution finale sur une plaque d'agar et incuber pendant quatre à sept jours avant de compter les colonies.
Comptage manuel
La principale astuce pour compter les colonies est de compter chaque point de la colonie une fois. Une approche consiste à définir la boîte de Pétri sur un fond de grille et à compter les colonies dans chaque cellule de la grille, en effectuant un schéma méthodique dans toutes les cellules. Le marquage des colonies comptées au dos de la boîte de Pétri peut également être une approche utile. En règle générale, vous devrez compter au moins trois assiettes; Selon Microbiology Network, une entreprise qui fournit des services de conseil aux laboratoires et aux fabricants, n’utilisez que des plaques contenant de 30 à 300 colonies pour faire des conclusions solides. Les plaques avec des colonies qui sont trop nombreuses pour compter ou avec trop peu de colonies doivent être ré-étalonnées à partir d'une nouvelle dilution.
Comptage automatisé
L'erreur humaine ajoute au temps nécessaire pour compter manuellement les colonies. Pour améliorer à la fois la précision et l'efficacité, placez la boîte de Pétri dans un appareil automatique de comptage des colonies. Les compteurs de colonies automatisés prennent une image du plat, séparent les colonies du fond, puis utilisent un algorithme pour compter les colonies sur la plaque. Les algorithmes peuvent avoir des difficultés à différencier les colonies lorsque deux colonies ou plus se touchent, ce qui en fait un domaine de développement logiciel en cours.
Rendre le comptage plus compliqué
La précision du calcul de la densité microbienne à partir du nombre de colonies présente certaines limites. Les unités formant des colonies peuvent être une cellule unique, une chaîne de cellules ou un bloc entier de cellules. L'hypothèse est qu'une colonie représente une cellule, de sorte que les concentrations calculées à partir du nombre de colonies peuvent être faibles. Différents microbes nécessitent des conditions de croissance différentes, et les colonies sur la plaque ne représentent que les microbes qui se développent sur ce support de croissance dans ces conditions d'incubation. De plus, le comptage des colonies n’enregistre pas les cellules mortes, ce qui est important lorsque vous avez besoin de la concentration de cellules dans l’échantillon d’origine.