Contenu
- Dilutions en série
- Préparation des plaques pour calculer le titre
- Compter et calculer le titre du virus
- Avertissements
Calculer le titre d'un virus est une manière compliquée de dire qu'un scientifique compte le nombre de virus dans un échantillon particulier. Pour calculer les titres viraux, les scientifiques infectent des plaques de bactéries en croissance avec des solutions virales à différentes concentrations et déterminent le nombre de virus dans la solution d'origine en comptant les bactéries décédées des suites de l'infection virale.
Dilutions en série
Mettez des gants, remplissez 10 tubes de culture avec 9 ml de bouillon et étiquetez-les «10 ^ -1», «10 ^ -2», «10 ^ -3» et ainsi de suite jusqu'à «10 ^ -10». sera utilisé pour les dilutions en série virales utilisées pour calculer le titre du phage. Étant donné que les virus peuvent atteindre des concentrations incroyablement élevées, vous devez les diluer pour pouvoir les compter efficacement. Chaque tube représente une dilution de dix fois le virus.
Prenez 1 ml de la culture de virus pour laquelle vous souhaitez calculer le titre du phage et transférez-le dans le tube intitulé «10 ^ -1» avec une pipette. Bien mélanger le tube. C'est votre première dilution au dixième.
Prenez 1 ml de la culture mélangée de votre tube étiqueté «10 ^ -1» et transférez-le avec une nouvelle pipette dans le tube suivant, étiqueté «10 ^ -2». Mélangez également ce tube.
Continuez ce motif pour créer une série de dilutions en série. Vous allez vous retrouver avec 9 tubes de 9 ml et 1 tube de 10 ml. Les charges virales dans vos tubes seront diluées de 10 fois (votre premier tube) ou 100 fois (votre second tube) à dix milliards de fois (votre dernier tube).
Préparation des plaques pour calculer le titre
Prenez 10 tubes de gélose tryptone soft et 10 boîtes de Pétri et étiquetez-les pour qu'ils correspondent à vos tubes de dilution en série.
Desserrez les capuchons pour qu’ils ne ressortent pas sous la chaleur, puis placez vos tubes d’agar dans un bécher d’eau bouillante. Cela fera fondre la gélose afin que vous puissiez la verser dans des boîtes de Petri.
Transférez vos tubes dans un bain d’eau chaude à un minimum de 45 degrés Celsius. Cela garantira que votre agar ne se solidifie pas dans les tubes avant que vous ayez une chance de le verser dans une boîte de Pétri.
Ajouter deux gouttes de culture bactérienne à votre agar et mélanger doucement. Ce sont les bactéries qui seront tuées, ce qui vous permet de compter le nombre de particules de virus dans une solution donnée.
Ajouter 1 ml de chaque dilution en série au tube d'agar correspondant pendant que les tubes sont encore dans le bain d'eau chaude. Par exemple, 1 ml de votre dilution en série 10 ^ -1 doit être versé dans le tube de gélose étiqueté «10 ^ -1».
Mélangez chaque tube puis versez chaque tube dans la plaque de Petri avec l'étiquette correspondante. Cela créera une fine couche de gélose qui a été inoculée avec des bactéries et des virus dans chaque plaque. Laissez les plaques pousser pendant la nuit dans un incubateur.
Compter et calculer le titre du virus
Sortez vos assiettes de l'incubateur et examinez-les. Vous devriez voir des zones nuageuses sur la plaque où les bactéries se sont développées, à l'exception de petites taches claires appelées plaques. Ces plaques sont des plaques de bactéries mortes et chaque plaque représente un virus.
Trouvez une assiette qui a entre 30 et 300 plaques et comptez le nombre exact de plaques sur cette assiette.
Prenez le nombre de plaques dans votre assiette et multipliez par 10. Si vous comptez 157 plaques, vous obtiendrez 1570.
Multipliez le nombre obtenu à l'étape précédente par l'inverse du nombre inscrit sur votre tube de dilution. Par exemple, si la plaque que vous avez sélectionnée est la plaque 10 ^ -5, multipliez 1570 par 10 ^ 5 pour obtenir 157000000. Ce nombre final correspond au titre de votre phage et représente le nombre de virus par ml de votre culture d'origine.