Les scientifiques et les techniciens doivent souvent calculer la concentration de cellules dans une suspension. Par exemple, lorsqu'un patient fait prélever son sang chez un médecin, le laboratoire peut utiliser certaines méthodes pour rechercher la quantité de globules blancs dans un volume de sang donné. Cela donne au médecin beaucoup d'informations sur la santé de son patient, en particulier sur son système immunitaire et sur le fait qu'il combat ou non une infection ou une autre maladie. Des tests comme celui-ci peuvent rechercher de nombreuses autres cellules dans le sang, ainsi que le liquide céphalorachidien et d'autres liquides organiques, tels que le nombre de spermatozoïdes dans le sperme à des fins de fertilité. Les scientifiques calculent également les concentrations cellulaires de bactéries, levures et autres microorganismes à des fins diverses, allant de la recherche écologique aux technologies industrielles. L'une des techniques les plus courantes est également enseignée dans de nombreux cours de biologie universitaires et utilise un appareil appelé chambre de comptage.
Avant que la suspension de cellules puisse entrer dans la chambre de comptage, il pourrait être nécessaire de la diluer car elle pourrait contenir des milliers ou des millions de cellules. Dans ce cas, les cellules ne peuvent raisonnablement pas être comptées. Pour diluer l'échantillon, utilisez une pipette stérile pour placer dix microlitres de la solution de cellules dans un tube à essai contenant 90 microlitres d'un diluant. Le type de diluant dépendra du type de cellule. Mélangez bien. Cette solution est maintenant dix fois plus diluée que l'échantillon initial, son facteur de dilution est donc 10-1. Étiquetez-le. Répétez cette opération plusieurs fois, en utilisant une pipette stérile à chaque fois, jusqu'à ce que la solution soit suffisamment diluée. Si vous l'avez dilué une seconde fois, le second tube à essai était 100 fois plus dilué que la solution initiale, le facteur de dilution était donc 10-2 etc.
Vous devrez peut-être essayer plusieurs dilutions pour déterminer le facteur de dilution approprié pour la chambre de comptage. Une chambre de comptage est fondamentalement une très petite boîte rectangulaire transparente avec une profondeur précise et une grille précise inscrite sur le dessus. Il est également appelé hémocytomètre ou parfois hémacytomètre. L’objectif est que la suspension soit suffisamment diluée pour que, lorsqu’elle est visualisée dans la chambre de comptage, aucune cellule ne se chevauche, et elles sont réparties sur l’ensemble de la grille de manière uniforme. Pipeter la suspension diluée contenant les cellules dans le puits de la chambre de comptage, où elle s’installera dans la chambre à grille par capillarité. Placez la chambre de comptage sur la platine du microscope et visualisez-la à faible puissance.
La grille contient des carrés composés de carrés encore plus petits. Sélectionnez environ quatre ou cinq carrés, ou le nombre dont vous avez besoin pour compter au moins 100 cellules, selon un modèle de votre choix, tel que les quatre coins et un carré central. Si les cellules sont grandes, il peut s'agir des grands carrés, mais si les cellules sont petites, vous pouvez choisir les plus petits.
Le volume spécifique de chaque carré de la grille peut varier selon le fabricant de la chambre de comptage, mais souvent, la profondeur de la chambre est de 0,1 millimètre, la surface des grands carrés est de 1 millimètre carré et celle des plus petits carrés est de 0,04 millimètre carré. Les plus grands carrés ont donc un volume de 0,1 millimètre cube. Pour cet exemple, supposons que vous avez compté un total de 103 cellules dans cinq carrés et que vous avez dilué l’échantillon initial jusqu’à ce que le facteur de dilution soit égal à 10.-2.
Si chaque carré de la grille a un volume de 0,1 millimètre cube et que cinq ont été comptés, le volume total de la chambre qui a été compté était de 0,5 millimètre cube et il y avait 103 cellules. Doubler pour en faire un millimètre cube en ferait 206 cellules. Un centimètre cube équivaut à 1 millilitre, ce qui est une mesure utile pour les liquides. Il y a 1 000 millimètres cubes dans un centimètre cube. Par conséquent, s'il y avait eu un centimètre cube ou un millilitre de suspension, vous auriez compté 206 000 (206 x 1 000) cellules. Voici à quoi cela ressemble comme une équation:
Volume du carré de la grille × nombre de carrés comptés = volume total de la suspension comptée
Nombre de cellules ÷ volume de suspension comptée = nombre de cellules par millimètre cube
Nombre de cellules par millimètre cube × 1000 = nombre de cellules par millilitre
Vous devrez tenir compte de toute dilution effectuée pour rendre la solution initiale comptable au microscope. Dans cet exemple, le facteur de dilution est 10-2. Pour calculer la concentration initiale de la solution:
Nombre de cellules par millilitre factor facteur de dilution = concentration en cellules
Pour cet exemple, le nombre de cellules par millilitre est de 206 000 et divisé par 10-2 (0,01) donne une concentration cellulaire de 20 600 000 cellules par millilitre dans l'échantillon initial.