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Quantifiez votre échantillon d'ARN en mesurant son absorbance de la lumière ultraviolette (UV). Un spectrophotomètre à nano-gouttesutilisez seulement un ou deux microlitres de votre échantillon, que vous pourrez récupérer. D'autres spectrophotomètres nécessitent un échantillon beaucoup plus grand. Le coefficient d'extinction des nucléotides à une longueur d'onde UVde 20 nm sur un trajet optique de 1 cm = 20. Sur la base de ce coefficient d’extinction, l’absorbance de 40 µg / ml d’ARN dans les mêmes conditions est égale à un. En utilisant cette information,vous pouvez calculer la concentration de votre échantillon d'ARN.
Faites une dilution, si nécessaire, de votre échantillon. Une dilution standard pour une microcuvette est de 1:40. Faire cette dilution parajouter 2 µL d’échantillon d’ARN à 78 µL d’eau stérile.
Suivez les protocoles de votre spectrophotomètre pour calibrer l’appareil en utilisant un blanc puis déterminez ledensité optique de votre échantillon à une longueur d'onde ultraviolette de 260 nm.
Multipliez l'absorbance de votre échantillon par votre facteur de dilution par 40 μg d'ARN / mL. L'équation serait: "ARNconcentration (µg / ml) = (OD260) x (facteur de dilution) x (40µg ARN / ml) / (1 unité OD260) "(Hofstra.edu) Par exemple: Si vous avez dilué votre échantillon de 1:40 et votrela lecture de l'absorbance était de 0,08, vous multiplieriez 0,08 x 40 x 40 = 128 µg / ml = 0,13 µg / μL
Déterminez la pureté de votre échantillon en prenant une autre absorbancelecture à la longueur d'onde UV 280 nm. Le rapport OD 260 / DO 280 indique si et à quel niveau votre échantillon est contaminé par des protéines ou du phénol. Un résultat de 1.8 à 2.0 indiqueARN de qualité.