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Le bouillon nutritif liquide est utilisé pour la culture de bactéries telles que Escherichia coli. Les recettes pour ce bouillon varient en fonction de l'espèce bactérienne et de la présence de modifications génétiques, par exemple la résistance aux antibiotiques. Le bouillon peut être solidifié en ajoutant de la gélose, ce qui permet aux bactéries de former des colonies distinctes, tandis qu'en culture liquide, elles se dispersent simplement dans le volume. C'est une technique de base mais essentielle pour les méthodes avancées telles que le clonage de gènes ou les dosages microbiologiques. Cet article suppose que les souches de laboratoire standard Escherichia coli doivent être cultivées sur des plaques de gélose au bouillon Luria (LB) (ou boîtes de Pétri).
Peser 10 grammes de tryptone de qualité bactérienne, 5 grammes d'extrait de levure, 5 grammes de chlorure de sodium, 15 grammes d'agar ou de gélose et 1 millilitre d'hydroxyde de sodium 1N. Mélangez-les avec un volume d’eau stérile distillée et autoclavée jusqu’à obtenir 1 litre de milieu. Autoclave les médias dans des bouteilles ou des flacons mal fermés pendant 25 minutes. Laisser refroidir à environ 50 degrés Celsius avant d'ajouter les réactifs qui seront détruits à haute température, tels que les antibiotiques ou autres suppléments nutritionnels.
Laissez le support autoclavé refroidir à 50 degrés Celsius et au minimum à 45 degrés Celsius, car la gélose se déposera dans son récipient avant de pouvoir être versée. Obtenir des boîtes de Pétri stériles et en verser suffisamment pour couvrir toute la surface de la plaque et au moins la moitié de sa profondeur. Évitez de trop remplir les plaques et, de préférence, ne laissez pas la gélose entrer en contact avec le bord supérieur du plat. Laissez les plaques se solidifier dans un environnement stérile (par exemple sous une hotte à flux laminaire) en laissant les couvercles ouverts et dans un coin de la hotte.
Séchez les assiettes. Bien que les plaques puissent être utilisées dès leur prise, une certaine humidité sera présente à la surface de la gélose, ce qui empêchera les colonies bactériennes d'adhérer suffisamment. Par conséquent, il est préférable de sécher les plaques avant d'appliquer des bactéries, par exemple en les laissant reposer à la température ambiante pendant quelques jours ou une demi-heure sous une hotte à flux laminaire ou dans un incubateur à 37 degrés Celsius.
Rangez les assiettes. Les assiettes séchées doivent être empilées à l'envers (sur l'envers) sur les couvercles et ramenées dans leur emballage d'origine, refermées avec un ruban adhésif et emballées dans du papier d'aluminium à l'abri de la lumière ou dans un récipient approprié. Écrivez toujours la date de préparation sur les assiettes et évitez de l’utiliser si les assiettes ont plus de 2 mois.