Contenu
- Avantage: sensibilité
- Avantage: spécificité
- Inconvénient: Sujet à des résultats faux ou subjectifs
- Inconvénient: coût élevé et demande technique
Western blot, une technique analytique utilisée pour localiser une protéine spécifique dans un échantillon donné, utilise l'aptitude d'un enzyme ou d'un anticorps primaire marqué par fluorescence à se lier à son antigène spécifique. Il s’agit d’un processus en trois étapes commençant par une électrophorèse sur gel, suivi d’un blotting membranaire et d’un sondage avec des anticorps. La détection des protéines peut être directe ou indirecte, cette dernière utilisant un anticorps secondaire marqué dirigé contre le primaire. Bien que accepté comme technique d’analyse protéique de routine, le Western Blot présente à la fois des avantages et des inconvénients.
Avantage: sensibilité
L'un des principaux arguments en faveur de Western Blot est sa sensibilité. En raison de sa capacité à détecter aussi peu que 0,1 nanogramme de protéine dans un échantillon, la technique peut théoriquement servir d’outil de diagnostic précoce efficace, détectant la moindre réponse immunogène d’un virus ou d’une bactérie dans un échantillon de patient. Un transfert Western indirect s’appuie en outre sur cette sensibilité de la capacité de l’anticorps secondaire à amplifier l’intensité du signal détecté par le système d’imagerie. Une plus grande sensibilité signifie que moins d’anticorps sont nécessaires aux tests, ce qui réduit considérablement les coûts de laboratoire.
Avantage: spécificité
La technique du western blot doit sa spécificité à deux facteurs importants. Tout d'abord, l'électrophorèse sur gel trie un échantillon en protéines de taille, de charge et de conformation différentes. Ce processus est en soi un énorme pas en avant dans la détection, car des bandes formées dans le gel donnent déjà des indices sur la taille de la protéine ou du polypeptide d’intérêt. La spécificité de l'interaction anticorps-antigène constitue le deuxième grand facteur. Étant donné que les anticorps spécifiques présentent une affinité pour des protéines spécifiques, le processus peut détecter de manière sélective une protéine cible même dans un mélange de 300 000 protéines différentes.
Inconvénient: Sujet à des résultats faux ou subjectifs
Malgré sa sensibilité et sa spécificité, un western blot peut toujours produire des résultats erronés. Un résultat faussement positif lorsqu'un anticorps réagit avec une protéine non intentionnelle, ce qui se produit fréquemment lorsqu'un patient soumis au test de dépistage du VIH présente une tuberculose ou un certain nombre d'infections parasitaires. Un faux négatif, en revanche, peut facilement se produire si les protéines plus grosses ne disposent pas de suffisamment de temps pour être transférées correctement à la membrane. Un transfert et un traitement incorrects produisent souvent des bandes asymétriques, décolorées ou même multiples, les résultats des tests étant donc soumis à l'interprétation du technicien.
Inconvénient: coût élevé et demande technique
Le coût d'un transfert Western est composé des dépenses individuelles importantes pour les anticorps marqués, des analystes qualifiés et du matériel de laboratoire. Procédé délicat, le Western Blot nécessite une précision à chaque étape pour une identification correcte des composants d’un échantillon. Une erreur mineure dans la concentration de réactif ou dans la période d'incubation peut être désastreuse pour l'ensemble du processus. Enfin, les équipements nécessaires à la détection et à l'imagerie - systèmes de détection chimioluminescents, fluorescents, radioactifs ou laser - peuvent s'avérer trop coûteux pour une unité de microbiologie moyenne.