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Les scientifiques utilisent des dilutions en série (une série de dilutions à 1:10) pour calculer la densité de population des cultures bactériennes. Lorsqu'une goutte de culture contenant un petit nombre de bactéries est étalée et incubée, chaque cellule sera théoriquement suffisamment éloignée des autres cellules pour former sa propre colonie. (En réalité, certaines colonies peuvent être les descendants de deux cellules voisines, mais cela est rare dans les cultures diluées. Le nombre de colonies est donc une très bonne estimation du nombre de cellules transférées à l'origine sur la plaque.) inconnue, il faut utiliser diverses dilutions pour ne former qu’une plaque avec un nombre approprié de colonies.
Dilutions en série
Étiquetez les six éprouvettes (contenant chacune 9 mL de milieu de croissance) de 1 à 6. Etiquetez les six plaques d'agar de 1 à 6. Utilisez une pipette et des pointes de pipette stériles de 1 ml pour transférer 1 mL de culture bactérienne dans un tube. 1.
Bien mélanger et transférer 1 ml du tube 1 dans le tube 2 à l’aide d’une pipette et d’embouts stériles de 1 ml.
Répétez l'étape 2 pour les tubes restants, en transférant chaque fois 1 ml du tube le plus récemment utilisé au tube suivant.
Utilisez une pipette et des embouts stériles de 0,1 mL pour transférer 0,1 mL du tube 1 dans une plaque de gélose. Faites flamber une tige de verre en forme de L et utilisez-la pour répartir la goutte uniformément autour de la plaque. Incuber la plaque pendant 48 heures à une température appropriée aux bactéries utilisées. Différents types de bactéries ont différentes températures de croissance optimales. Si vous ne pouvez pas trouver la température de croissance optimale à l'aide de matériel de référence, essayez d'incuber les plaques à 25 et 37 degrés.
Répétez l'étape 4, en transférant chaque fois le liquide d'un tube à essai différent sur la plaque correspondante.
Calculs de population
Observez les six plaques et choisissez celle contenant 30 à 200 colonies isolées.
Multipliez le nombre de colonies sur la plaque par 10 pour calculer le nombre de cellules par ml de culture à partir du tube de dilution utilisé.
Multipliez le nombre de l'étape 2 par 10 ^ (numéro de plaque) pour calculer le nombre de cellules par ml de culture d'origine. La valeur de 10 ^ (numéro de plaque) est le facteur de dilution de la culture utilisée pour inoculer cette plaque.