Les chimistes utilisent la chromatographie en phase liquide à haute performance, ou HPLC, pour séparer des mélanges de composés. En général, la méthode consiste à injecter un échantillon dans une colonne où il se mélange avec un ou plusieurs solvants. Différents composés s'adsorbent ou «collent» à la colonne à des degrés différents; et lorsque le solvant pousse les composés à travers la colonne, l’un des composants du mélange quitte la colonne en premier. L'instrument détecte les composés lorsqu'ils sortent de la colonne et produit un chromatogramme constitué d'un tracé avec le temps de rétention sur l'axe des x et l'intensité du signal du détecteur sur l'axe des y. Lorsque les composés quittent la colonne, ils produisent des «pics» dans le chromatogramme. En général, plus la résolution est élevée, plus les pics du chromatogramme sont éloignés et rapprochés. Les scientifiques considèrent qu'une résolution de 1,0 ou plus représente une séparation adéquate.
Mesurez les largeurs de deux pics adjacents dans le chromatogramme en notant où les valeurs de l'axe des x sont à la base de chaque pic. L'axe des abscisses représente le temps de rétention, généralement mesuré en secondes. Ainsi, si un pic commence à 15,1 secondes et se termine à 18,5 secondes, sa largeur est de (18,5 - 15,1) = 3,4 secondes.
Déterminez les temps de rétention en notant le temps, c’est-à-dire l’emplacement sur l’axe des x, qui correspond aux emplacements des maxima des pics. Cette valeur sera normalement à peu près à mi-chemin entre les deux valeurs utilisées pour calculer la largeur à l’étape 1. L’exemple donné à l’étape 1, par exemple, présenterait un maximum au bout de 16,8 secondes environ.
Calculer la résolution, R, entre deux pics de
R = (RT1 - RT2) /,
où RT1 et RT2 représentent les temps de rétention des pics 1 et 2 et W1 et W2 représentent les largeurs des pics pris à leurs bases. En reprenant l'exemple des étapes 2 et 3, un pic présente un temps de rétention de 16,8 secondes et une largeur de 3,4 secondes. Si le second pic présentait un temps de rétention de 21,4 secondes avec une largeur de 3,6 secondes, la résolution serait alors
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.