Contenu
- Comment fonctionne l'électrophorèse sur gel
- Une procédure d'électrophorèse de base
- Détermination de la longueur des fragments inconnus
Pour mesurer la longueur des fragments d'ADN, qui sont beaucoup plus petits que les cellules, les microbiologistes ont besoin d'une astuce, et la plus pratique est l'électrophorèse sur gel. Cette méthode repose sur le fait que les fragments d'ADN sont chargés et constitue une alternative aux méthodes plus coûteuses, telles que la cristallographie aux rayons X, à l'origine de la découverte de la structure en double hélice de l'ADN.
Comment fonctionne l'électrophorèse sur gel
Parce que les molécules d'ADN sont chargées, elles sont affectées par un courant électrique. Lorsque vous les placez dans un gel neutre et que vous placez un courant sur le gel, les molécules migrent vers l'électrode positive (anode). Étant donné que les molécules d'ADN de différentes tailles portent la même charge, les plus petites voyagent plus rapidement. Ce processus sépare les molécules en bandes pouvant être comparées à des échantillons de tailles connues.
Une procédure d'électrophorèse de base
Le gel est généralement composé d'agarose, un polysaccharide qui, lorsqu'il est chauffé dans une solution tampon, forme un gel semi-solide légèrement poreux. À une extrémité, le gel forme de minuscules empreintes, appelées puits, dans lesquelles le chercheur place les échantillons d'ADN à l'étude, ainsi que des échantillons de référence de longueur connue, appelés échelles d'ADN. Les longueurs des fragments d'échelle ont été prédéterminées par une autre méthode, telle que la cristallographie aux rayons X.
Lorsque le gel est immergé dans une solution conductrice et que la tension est appliquée, les fragments commencent à migrer à travers le gel - les plus petits en premier et les plus grands, plus lents derrière. Ils finissent par former eux-mêmes des bandes spectrales en fonction de leur taille.
Une fois que cela se produit, le chercheur coupe l’alimentation, insuffle un gel de liaison au DVA dans le gel et examine les spécimens sous ultraviolets. En utilisant l'échelle comme référence, le chercheur peut déterminer la taille de chacun des fragments dans une bande visible. Seules les bandes sont visibles - les fragments d'ADN individuels sont trop petits pour être vus.
Détermination de la longueur des fragments inconnus
Il n’est pas probable que toutes les bandes d’un échantillon soient jumelées à une bande de l’échelle. Par conséquent, pour déterminer la taille de ces fragments inconnus, les scientifiques tracent généralement un graphique. Sur l’axe des x, la distance parcourue par chaque bande de l’échelle en millimètres, tandis que sur l’axe des y, la taille de chaque bande. Lorsque les points sont reliés par une courbe, la taille de toute bande peut être extrapolée à partir de la courbe après avoir mesuré la distance parcourue par cette bande en millimètres.