Contenu
- L'éthanol est un bon solvant
- L'éthanol augmente la concentration en ADN
- Facteurs supplémentaires dans le processus
Les scientifiques peuvent décomposer ou séquencer l'ADN en ses nucléotides constitutifs, ce qui peut par exemple indiquer à une personne si elle est atteinte d'une maladie génétique. Les méthodes courantes d'extraction de l'ADN impliquent l'utilisation d'isopropanol ou d'éthanol dans une étape du processus. Cependant, les cellules contiennent beaucoup d'autres molécules telles que des protéines et des lipides, et les scientifiques souhaitent naturellement obtenir une solution d'ADN aussi pure que possible.
Les méthodes d'extraction de l'ADN impliquent généralement plusieurs étapes: les cellules doivent être ouvertes, les lipides membranaires doivent être éliminés et l'ADN doit être séparé des protéines, de l'ARN et d'autres contaminants. Deux protocoles typiques sont la lyse alcaline pour l'extraction de l'ADN plasmidique bactérien et l'extraction au phénol-chloroforme. Dans les deux méthodes, la précipitation d'acides nucléiques à l'éthanol ou à l'isopropanol est l'une des étapes finales. Une fois que l'ADN ou l'ARN a été précipité (est tombé de la solution), il peut être remis en suspension dans de l'eau.
L'éthanol est un bon solvant
L’éthanol et l’isopropanol se mélangent bien (sont miscibles à l’eau), mais ils ont une constante diélectrique inférieure à celle de l’eau, ce qui signifie que leur capacité à protéger les charges positives et négatives de la solution et à les maintenir séparées est beaucoup plus faible. La constante diélectrique pour l'eau, par exemple, est de 78,5, tandis que la constante pour l'éthanol est de 24,3. L'ADN est chargé négativement, il est donc attiré par les ions positifs de la solution, comme le potassium ou le sodium. L'éthanol a une capacité plus faible que l'eau pour séparer les ions chargés positivement et l'ADN.
L'éthanol augmente la concentration en ADN
L'éthanol rend également l'ADN moins soluble pour une autre raison. Comme les molécules d'éthanol peuvent former des interactions appelées liaisons hydrogène avec les molécules d'eau, elles diminuent le nombre de molécules d'eau disponibles pour hydrater l'ADN. Entre cet effet et la constante diélectrique inférieure, l'éthanol provoque essentiellement l'agrégation de l'ADN avec des ions positifs dans la solution, formant un solide ou un précipité au fond du tube. La précipitation de l'ADN sert à le rendre plus concentré, car les autres contaminants de la solution ne précipitent pas en même temps.
Facteurs supplémentaires dans le processus
Le lavage à l'éthanol sert également à éliminer les contaminants de faible poids moléculaire tels que les sels et les détergents. Le sel choisi peut varier selon qu'il est nécessaire de précipiter le détergent au dodécylsulfate de sodium (SDS) issu d'une étape antérieure; Le dodécyl sulfate de potassium, par exemple, est insoluble et précipitera. Par conséquent, l’acétate de potassium utilisé dans une lyse alcaline peut éliminer le SDS avant d’ajouter l’éthanol / isopropanol. L'éthanol peut également être utilisé pour précipiter l'ARN pour les mêmes raisons, bien que la précipitation de l'ARN nécessite généralement davantage d'éthanol.